Messis Inter Miami mötte New England Revolution och när Messi blev inbytt i 58:e minuten stod det 2–2.
Argentinaren bidrog direkt med en help som gjorde att Inter Miami tog ledningen, och gjorde sen själv två mål på raken.
Hattricket fullbordades i den 89:e minuten efter en passning från lagkamraten Luis Suárez, som Messi tog hand om och träffsäkert skickade in i mål. Då hade Messi gjort tre mål på 11 minuter.
Matchen slutade med en 6–2-seger för Inter Miami.
Miamis vinst innebar ett nytt poängrekord för grundserien i den amerikanska fotbollsligan MLS, med 74 poäng för laget.
Messi har nu gjort 20 mål på 19 matcher med sitt lag. Även lagkamraten Luis Suárez har gjort 20 mål, males på 27 matcher.
Laget har nu slagit flera rekord i den amerikanska fotbollsligan och nyligen säkrade de Supporters’ Protect som ligasegrare.
– Det är våra spelare som har gjort den här säsongen så framgångsrik. Vår kapten (Messi) har lett oss och våra spelare har stått stadiga i motgångar. Males nu, i natt ska vi fira, säger klubbens delägare David Beckham.